- Oggetto:
- Oggetto:
Biotecnologie Cellulari
- Oggetto:
Anno accademico 2008/2009
- Codice dell'attività didattica
- B8038
- Docenti
- Saverio Francesco Retta (Titolare del corso)
Paola Defilippi (Titolare del corso) - Corso di studi
- laurea i^ liv. in biotecnologie - a torino
- Anno
- 3° anno
- Tipologia
- Indirizzo Bio-Molecolare
- Crediti/Valenza
- 6
- SSD dell'attività didattica
- BIO/13 - biologia applicata
- Oggetto:
Sommario insegnamento
- Oggetto:
Programma
1) Le colture cellulari: le colture primarie, le linee stabilizzate, le cellule immortalizzate, gli ibridomi, le cellule staminali.
2) L’analisi delle proteine cellulari in vitro (saggi qualitativi e quantitativi): estrazione e purificazione delle proteine; analisi delle proteine mediante elettroforesi unidimensionale e bidimensionale, immunoprecipitazione, Western blotting, marcatura metabolica e saggi radioimmunologici, analisi dello stato di attivazione di proteine con funzioni regolatrici, saggi di attività chinasica. Le applicazioni di spettrometria di massa. Studi di interazione proteina-proteina: i saggi di “pull-down”; la tecnica del doppio ibrido.
3) Le proteine ricombinanti: i sistemi di espressione procariotici ed eucariotici, la produzione e purificazione proteine di fusione, gli impieghi delle proteine di fusione.
Esempio: Produzione di agenti terapeutici per l’uomo.
4) La trasfezione delle cellule eucariotiche per l’espressione di proteine di interesse: tecnica del Ca2+/fosfato, tecnica del DEAE-dextrano, i liposomi, l’elettroporazione, i vettori virali.
Esempio: I sistemi virali per la terapia genica ex vivo ed in vivo.
5) I controlli post-trascrizionali dei livelli di espressione delle proteine. Il miglioramento della stabilità delle proteine.
Esempio: La modulazione dell’espressione e funzione dei recettori adesivi.
6) L’analisi delle proteine cellulari in vivo (localizzazione, dinamiche subcellulari e funzioni): microscopia ottica convenzionale e confocale; tecniche di immunofluorescenza ed immunocitochimica; l’uso delle proteine di fusione per l’analisi delle funzioni delle proteine; tecniche di microscopia a multifluorescenza in “time-lapse” per l’analisi delle dinamiche molecolari.
Le tecniche “F” e le loro applicazioni: “Fluorescence Resonance Energy Transfer” (FRET), “Fluorescence Recovery After Photobleaching” (FRAP), “Fluorescence Loss In Photobleaching” (FLIP).
Esempio: I meccanismi di regolazione della traslocazione nucleo-citoplasma di proteine.
Esercitazioni di laboratorio sulle tecniche trattate.
Testi consigliati e bibliografia
- Oggetto:
- 1) Alberts et al.- Biologia Molecolare della Cellula Zanichelli.
2) Glick e Pasternak Biotecnologia Molecolare Zanichelli.
3) Reed et al.- Metodologie di base per le Scienze Biomolecolari - Zanichelli.
4) Ninfa e Ballou - Metodologie di base per la Biochimica e la Biotecnologia - Zanichelli.
5) Articoli forniti dal docente. - Oggetto:
Note
Lezioni frontali (16 ore). Esercitazioni (32 ore)
Modalità desame: seminari degli studenti sugli argomenti svolti a lezione + prova orale- Oggetto: