Corso di Laurea in Biotecnologie

Biotecnologie Cellulari

Anno accademico 2007/2008

Sommario insegnamento

• Programma
• Testi consigliati e bibliografia
• Note
• Strumenti didattici

Programma

  1)     Le colture cellulari: le colture primarie,  le linee stabilizzate,  le cellule immortalizzate,  gli  ibridomi e la produzione degli anticorpi monoclonali. Le cellule staminali.

2)     Le proteine ricombinanti: vettori di espressione procariotici ed eucariotici per la produzione di proteine d’interesse,  produzione e purificazione di proteine native e chimeriche, produzione di anticorpi policlonali d’interesse attraverso l’uso di proteine ricombinanti.

3)     La trasfezione delle cellule eucariotiche per l’espressione di proteine d’interesse: tecnica del Ca²⁺/fosfato, tecnica del DEAE dextrano,  i liposomi come sistema di trasfezione,  l’elettroporazione, i vettori virali.

4)     L’analisi delle proteine cellulari in vitro (saggi qualitativi e quantitativi): estrazione delle proteine, purificazione ed arricchimento di una specifica proteina, analisi mediante elettroforesi unidimensionale e bidimensionale, immunoprecipitazione, Western blotting, marcatura metabolica ed analisi radioimmunologiche, saggi di attività enzimatica, saggi di “pull-down”, le applicazioni di spettrometria di massa.

5)     L’analisi delle proteine cellulari in vivo (localizzazione e dinamiche subcellulari): microscopia ottica convenzionale e confocale, tecniche di immunofluorescenza ed immunocitochimica, l’uso delle proteine di fusione per l’analisi delle funzioni delle proteine, tecniche di microscopia a fluorescenza in “time-lapse” per l’analisi delle dinamiche molecolari, analisi di interazioni proteina-proteina mediante la tecnica “Fluorescence Resonance Energy Transfer” (FRET).

6)     Studi di interazione proteina-proteina mediante i saggi di “pull-down” e la tecnica del doppio ibrido.

7)     L’uso di librerie di peptidi per l’identificazione di interazioni tra proteine.

8)     L’uso di  mutazioni dominanti negative e temperatura sensibili nello studio della funzione delle proteine.

Ninfa e Ballou, “Metodologie di base per la biochimica e la biotecnologia”, Zanichelli

Glick e Pasternak, “Biotecnologia Molecolare”, Zanichelli
Reed et al., “Metodologie di base per le scienze biomolecolari”, Zanichelli

Note

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