Corso di Laurea in Biotecnologie

Laboratorio di Biotecnologie Molecolari e Cellulari

Anno accademico 2010/2011

Sommario insegnamento

• Obiettivi formativi
• Risultati dell'apprendimento attesi
• Programma
• Testi consigliati e bibliografia
• Note
• Strumenti didattici

Obiettivi formativi

Modulo di Tecnologie ricombinanti: acquisire conoscenze generali dei metodi di ricombinazione, modificazione ed espressione del DNA. Acquisire abilità pratica diretta sul clonaggio del DNA in E. coli. Modulo di colture cellulari: acquisire le conoscenze di base dalle comuni tecniche di colture cellulari, le caratteristiche tecniche della strumentazione utilizzata e le misure di sicurezza associate alle manipolazioni.

Risultati dell'apprendimento attesi

Modulo di Tecnologie Ricombinanti: gli studenti dovranno avere padronanza teorica dei principali metodi di preparazione ed analisi di DNA ricombinante e un'abilità diretta sulla manipolazione di plasmidi in E. coli. Modulo di colture cellulari: Alla fine del corso gli studenti dovranno saper organizzare e gestire un laboratorio di colture cellulare.

Programma

Modulo molecolare (BIO/11, 3 CFU).

Teoria e metodi (lezioni):
* Clonaggio del DNA, sistemi vettore-ospite.
* Vettori per il clonaggio in procarioti
* Identificazione dei ricombinanti: metodi di ibridazione ed immunologici
* Il sequenziamento del DNA e le strategie per il sequenziamento dei genomi
* I progetti genoma, le banche-dati nucleotidiche ed i programmi in rete
* La mutagenesi "in vitro". Proteine di fusione e metodi di "tagging".
* Il clonaggio in eucarioti: S. cerevisiae e gene targeting.
* Trasferimento genico in cellule animali e studio funzionale dei geni
* Metodi di studio della struttura e dell?espressione genica.
* Animali transgenici, knock-out, knock-in e knock-out condizionale.
* Produzione di proteine ricombinanti

Laboratorio.
Sottoclonaggio di un cDNA in plasmide e selezione blu/bianco in E. coli; selezione di colonie ricombinanti, amplificazione e purificazione plasmidica; analisi di restrizione di plasmidi ricombinanti.

Modulo cellulare: lezioni 8 ore, il mercoledì dal 9/3/2011 al 30/3/2011, dalle 11 alle 13, Aula De Filippi,  v. Accademia Albertina 13.
* Introduzione all'attività di laboratorio di colture cellulari.
* Elementi di sicurezza di laboratorio
* Esercizi teorici di preparazione di soluzioni, mezzi di colture e diluizioni di cellule.
* Presentazione della strumentazione del laboratorio colture eÿ delle manipolazioni da eseguire. Consegna della linea cellulare
* Passaggio della linea cellulare, conta e allestimento delle piastre per valutare la crescita cellulare
* Congelamento e scongelamento della linea cellulare
* Colture cellulari: requisiti strumentali ed organizzativi
* Colture cellulari: mezzi di colura, metodologia di base

"Introduzione alle colture cellulari: metodiche relative" Mariotti et al. Morgan Edizioni Tecniche "Dai Geni ai Genomi" Dale e von Schantz, Edises.

Note

Prerequisiti: Biologia Molecolare – Genetica – Biologia Cellulare Modalità d’esame: tests scritti, relazione di laboratorio e colloquio a fine del corso

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