Corso di Laurea in Biotecnologie

Tecniche di Microscopia Applicata e Fisiologia

Applied Microscopy and Physiology Techniques

Anno accademico 2016/2017

Sommario insegnamento

• Obiettivi formativi
• Risultati dell'apprendimento attesi
• Modalità di insegnamento
• Modalità di verifica dell'apprendimento
• Attività di supporto
• Programma
• Testi consigliati e bibliografia
• Strumenti didattici

Obiettivi formativi

Obiettivi formativi principali:

• Conoscere i principi di funzionamento fondamentali della microscopia ottica ed elettronica.
• Conoscere ed applicare le principali tecniche di microscopia ottica convenzionale e confocale nell’ambito della ricerca biomedica di base ed applicata.
• Acquisire la capacità di allestire preparati per l’analisi microscopia; scegliere le tecniche di allestimento ed analisi più adeguate; interpretare e valutare criticamente i risultati ottenuti in funzione del metodo adottato.

Risultati dell'apprendimento attesi

Capacità di allestire preparati per l’analisi microscopia, scegliere le tecniche di allestimento ed analisi più adeguate, e interpretare e valutare criticamente i risultati ottenuti in funzione del metodo adottato.

Modalità di insegnamento

• Lezioni frontali
• Seminari specialistici
• Esercitazioni

Modalità di verifica dell'apprendimento

• Esame scritto: domande a risposta aperta su argomenti del corso
• Riconoscimento di preparati istologici

Attività di supporto

• Seminari di specialisti di tecniche di microscopia a fluorescenza e elettronica.
• Esercitazioni pratiche.

Programma

Modulo di Microscopia Applicata

• Principi fondamentali dell’osservazione microscopica
• Tecniche per la prearazione di cellule e tessuti per l’osservazione microscopica
• Preparazione e colorazione di sezioni per l’osservazione al Microscopio Ottico
• Conseguenze sull’osservazione delle tecniche impiegate
• Microscopia a contrasto di fase per cellule viventi
• Microscopia a contrasto interferenziale (DIC)
• Immunofluorescenza: principi e applicazioni
• Microscopia confocale
• Multifluorescence imaging 
• La microscopia in time-lapse.
• Proteine chimeriche fluorescenti: strategie sperimentali per monitorare la dinamica di una proteina e le sue relazioni con strutture subcellulari in cellule viventi.
• Le tecniche “F” e le loro applicazioni: “Fluorescence Resonance Energy Transfer” (FRET), “Fluorescence Recovery After Photobleaching” (FRAP), “Fluorescence Loss In Photobleaching” (FLIP), "Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy" (FLIM), ecc.
• La microscopia a due fotoni
• La microscopia correlativa
• La microscopia a super-risoluzione
• Principi e applicazioni della microscopia elettronica

        Esercitazioni al microscopio ottico

• Osservazione pratica di 25 preparati istologici rapprentativi di tutti gli organi e tessuti umani
• Osservazioni di preparati per microscopia a fluorescenza

Modulo di Tecniche fisiologiche

•  Elettrofisiologia:
• registrazione extracellulare
• registrazione intracellulare
• voltage-clamp
• patch-clamp
• Tecniche ottiche di misurazione di concentrazioni ioniche e di voltaggio, basate su indicatori fluorescenti
• Tecnica di applicazione rapida di sostanze mediante fotolisi di "caged compounds"
• Tecniche di stimolazione elettrica e optogenetica

Materiale didattico fornito dal docente.

Orario lezioni

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